CTS Xenon 电转染系统的实验数据

CAR T 细胞中的敲除和敲入性能。三个供体的 T 细胞，在 Neon 转染系统  (100 µL) 上或者使用 SingleShot (1 mL) 或 Multishot (9 mL) 耗材的 Xenon 电转染系统上，通过 Cas9 / gRNA 转染 FMC CAR 构建体，或保持未转染 (0)。72 小时后，表征细胞为未转染（TCRαβ⁺，灰色）、敲出但未被敲入（TCRαβ^–CAR^–，淡蓝色）或成功敲出和敲入（TCRαβ^–CAR⁺，深蓝色）。对于所有供体来说，Xenon 系统上的成功敲入百分比为 21.9 ％ 至 45.6 ％，甚至超过了 Neon 系统。

CAR T 细胞中的活性。同一实验中，72 小时后，使用台盼蓝染色法对细胞的活性进行评估。在三个供体中，Xenon 系统上的细胞活性为 64.6 ％ 至 83.6 ％。

CD4 与 CD8 T 细胞比值的保持。同一实验中，使用流式细胞术鉴别 CD4 和 CD8 T 细胞。未接受电转染处理的细胞（条件 0）的标准为单个未转染的活细胞 (TCRαβ⁺)，而接受电穿孔处理的细胞的标准为单个已敲除的活细胞 (TCRαβ^–)。在 Neon 系统  (100 µL) 和 Xenon 系统（ 1 和 9 mL）之间，未接受和接受电转染处理的细胞间的 CD4（浅蓝色）和 CD8（深蓝色）T 细胞的比例在相对一致。

流式细胞术下的 CAR T 细胞分析。同一实验中，使用流式细胞术分析电转染细胞。图和分析均为三个供体的代表结果。(A) 基于单个活细胞细胞标准，89.5% 的细胞失去了 TCR 功能 (TCRαβ^–)，因此指示敲出成功，而只有 9.59% 的细胞保留了 TCR 表达 (TCRαβ⁺），因此指示转染不成功。(B) 未转染细胞的分析结果显示了 CD4 (43.1%) 和 CD8 (51.7%) 单阳性 (SP) 细胞的百分比。双阳性 (DP)、双阴性 (DN)和 V5⁺ （成功敲入）细胞群较小且反映出噪声。(C) 敲除后细胞的分析同样显示了 CD4 (38.0%) 和 CD8 (49.5%) SP 细胞的百分比。31.2% 的敲除后细胞成功已敲入 (V5⁺)，其中包括 36.2% 的 CD4 和 30.2% 的 CD8。