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用于细胞和基因治疗的腺相关病毒生产
CTS AAV-MAX 无辅助病毒 AAV 生产系统
借助补充研究和按照 cGMP 生产的 AAV-MAX 解决方案，加快临床前进程。完善的 AAV 生产系统有助于实现从研究到临床和商业生产的无缝转化。
研究&开发 → 临床前 → 临床和商业生产
图1.CTS AAV-MAX 无辅助病毒 AAV 生产系统组件。
RUO 生产系统和 CTS AAV-MAX 生产系统的比较
AAV-MAX 无辅助病毒 AAV 生产系统能够实现从发现到研究和商业开发生产的平稳过渡，它提供了一个经优化、可扩展的平台，并提供了研究级和 cGMP 标准级试剂选项。图2展示了 CTS 和 RUO 系统在两种血清型上的等效性。
图2.研究级 (RUO) 与 CTS 试剂之间的 AAV 滴度比较。 AAV 血清型 AAV2 和 AAV6 是以 30 mL 的生产规模在 125 mL 摇瓶中生产的。病毒滴度测定结果表明，RUO 和 CTS AAV-MAX 系统试剂的性能等效。滴度通过 qPCR 测定。
| 属性 | AAV-MAX (RUO) | CTS AAV-MAX |
|---|---|---|
| 预期用途 | 仅供研究使用 | 供研究使用或生产基于细胞，基因或组织的产品 |
| 目录包装规格 | 1-10 L 生产规模 | 1–100 L 生产规模 |
| 配方 | 相同（培养基需要添加 GlutaMAX） | 相同（培养基含有 GlutaMAX） |
| 性能 | 相同 | 相同 |
| 生产者细胞系 |
|
|
| 法规支持文档 | 无 |
|
| GMP 生产规范 | 在通过 ISO 90001 或 ISO 13485 认证的场所中生产 | 生产符合 GMP 关于医疗器械的规定、21 CFR 第820部分、《美国药典》第<1043>条和《欧洲药典》第 5.2.12 条的有关规定。在通过 ISO 13485 认证的场所中生产 |
CTS AAV-MAX 无辅助病毒 AAV 生产系统组件
CTS 病毒生产细胞 (VPC) 2.0
- 克隆性 293F 来源的高产细胞系
- 经过优化，可在化学成分明确的培养基中进行高密度悬浮培养（>12 x 106 个细胞/mL）
- 无 SV40 大 T 抗原或基因工程
- 强大的可扩展性和传代稳定性
- 按照 21 CFR 211 和 EudraLex 第4卷进行记录和基于 cGMP 库进行生产，并按照 ICH Q5A 和 ICH Q5D 指导原则进行表征
图3. 病毒生产细胞2.0在多次传代过程中保持相似的生长曲线。 在病毒生产培养基中培养细胞，然后在接种后第4天至第7天测定培养活性和 VCD。
培养基
- CTS 病毒生产培养基
- 无动物源性成分
- 化学成分明确
- 无蛋白
- 无酚红
- 提供最大规格为 100 L 的现成包装
- 高级制粒技术 (AGT) 规格
- 颗粒状干燥培养基规格
- 无动物源性成分
- 化学成分明确
- 无蛋白
- 无酚红
- 提供最大规格为 100 L 的现成包装
- AGT 颗粒可快速溶解，并已针对 pH 和渗透压进行预调
图4.CTS 病毒生产培养基支持在多种规模的细胞培养中对 VPC 2.0 进行7天的高密度和稳定培养，而且无需额外的营养支持。VPC 2.0 在各种规模的培养中均以 0.5 x 106 个细胞/mL 的浓度开始培养，然后用 Vi-Cell XR 测定7天的生长情况。除了 5 L 摇瓶为 Corning 产品外，所用的其余摇瓶均为 Nalgene（赛默飞世尔科技）。
转染和生产
- CTS AAV-MAX 转染试剂和转染加强剂（AOF、CD）
- CTS AAV-MAX 增强剂（AOF、CD）
- CTS Viral-Plex™ 络合缓冲液（AOF、CD，无蛋白）
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图5.添加和未添加增强剂的 AAV 生产结果。在转染当天 (T=0)，将增强剂添加到制备的 VPC 2.0（3 x 106 个细胞/mL）中。为进行转染，将 GFP 表达转移质粒和辅助性质粒与相应的 Rep/Cap 质粒一并使用。转染后72小时，将 AAV-MAX 裂解缓冲液直接添加到培养物中，在 37℃ 下收获 AAV 2小时，然后通过 qPCR 对 AAV 滴度进行测定。将数据归一化为添加增强剂生产的 AAV 的滴度 (vg/mL)。
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图6.转染期间添加和未添加加强剂的 AAV 生产结果。为进行转染，将 GFP 表达转移质粒和辅助性质粒与相应的 Rep/Cap 质粒一并使用。转染后72小时，将 AAV-MAX 裂解缓冲液直接添加到培养物中，在 37℃ 下收获 AAV 2小时，然后通过 qPCR 对 AAV 滴度进行测定。将数据归一化为添加加强剂生产的 AAV 的滴度 (vg/mL)。
CTS 病毒生产细胞 (VPC) 2.0
- 克隆性 293F 来源的高产细胞系
- 经过优化，可在化学成分明确的培养基中进行高密度悬浮培养（>12 x 106 个细胞/mL）
- 无 SV40 大 T 抗原或基因工程
- 强大的可扩展性和传代稳定性
- 按照 21 CFR 211 和 EudraLex 第4卷进行记录和基于 cGMP 库进行生产，并按照 ICH Q5A 和 ICH Q5D 指导原则进行表征
图3. 病毒生产细胞2.0在多次传代过程中保持相似的生长曲线。 在病毒生产培养基中培养细胞，然后在接种后第4天至第7天测定培养活性和 VCD。
培养基
- CTS 病毒生产培养基
- 无动物源性成分
- 化学成分明确
- 无蛋白
- 无酚红
- 提供最大规格为 100 L 的现成包装
- 高级制粒技术 (AGT) 规格
- 颗粒状干燥培养基规格
- 无动物源性成分
- 化学成分明确
- 无蛋白
- 无酚红
- 提供最大规格为 100 L 的现成包装
- AGT 颗粒可快速溶解，并已针对 pH 和渗透压进行预调
图4.CTS 病毒生产培养基支持在多种规模的细胞培养中对 VPC 2.0 进行7天的高密度和稳定培养，而且无需额外的营养支持。VPC 2.0 在各种规模的培养中均以 0.5 x 106 个细胞/mL 的浓度开始培养，然后用 Vi-Cell XR 测定7天的生长情况。除了 5 L 摇瓶为 Corning 产品外，所用的其余摇瓶均为 Nalgene（赛默飞世尔科技）。
转染和生产
- CTS AAV-MAX 转染试剂和转染加强剂（AOF、CD）
- CTS AAV-MAX 增强剂（AOF、CD）
- CTS Viral-Plex™ 络合缓冲液（AOF、CD，无蛋白）
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图5.添加和未添加增强剂的 AAV 生产结果。在转染当天 (T=0)，将增强剂添加到制备的 VPC 2.0（3 x 106 个细胞/mL）中。为进行转染，将 GFP 表达转移质粒和辅助性质粒与相应的 Rep/Cap 质粒一并使用。转染后72小时，将 AAV-MAX 裂解缓冲液直接添加到培养物中，在 37℃ 下收获 AAV 2小时，然后通过 qPCR 对 AAV 滴度进行测定。将数据归一化为添加增强剂生产的 AAV 的滴度 (vg/mL)。
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图6.转染期间添加和未添加加强剂的 AAV 生产结果。为进行转染，将 GFP 表达转移质粒和辅助性质粒与相应的 Rep/Cap 质粒一并使用。转染后72小时，将 AAV-MAX 裂解缓冲液直接添加到培养物中，在 37℃ 下收获 AAV 2小时，然后通过 qPCR 对 AAV 滴度进行测定。将数据归一化为添加加强剂生产的 AAV 的滴度 (vg/mL)。
扩展 CTS AAV-MAX 系统
现有 AAV 生产系统面临的相关挑战包括滴度低、cGMP 质粒 DNA 成本高、可扩展性较差，以及缺乏适用的 cGMP 标准生产试剂。借助 CTS AAV-MAX 系统，您可使用预先优化的试剂生产高滴度 AAV，从而克服这些挑战。该试剂获得产品特异性法规支持，专为在可扩展悬浮平台（可在扩大规模的同时保持体积病毒滴度）中生产 AAV 而开发。
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图7. 在 250 mL 摇瓶和 50 L 生物反应器中生产 AAV 的 AAV6 基因组滴度。AAV6 的生产是使用了完善的 CTS AAV-MAX 系统。粗提样本中的滴度通过 ddPCR 测定。
用于 AAV-MAX 生产工作流程的细胞治疗系统 (CTS) 试剂
Gibco 细胞治疗系统 (CTS) 试剂是按照 GMP 生产的产品，专为细胞和基因治疗设计，因此您可放心地从法疗法走向临床应用。
| cGMP 生产规范 | 检测和文档记录 | 经验证的使用 |
|---|---|---|
| 生产符合 GMP 关于医疗器械的规定、21 CFR 第820部分、《美国药典》第<1043>条和《欧洲药典》第5.2.12条。生产场所已在 FDA 注册，通过了 ISO 13485 认证，并且定期接受稽查。 | 可追溯性文档—包括药品主文件 (DMF) 和/或法规支持文件 (RSF)、原产地证书 (CoO)。 产品安全检测—包括适用产品的无菌性、内毒素和支原体。 | 应用于 FDA 批准及 EMA 批准的 CAR T 治疗和较先得到 FDA 批准的治疗性癌症疫苗。[1] 应用于100多项临床试验。 |
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